概要
一本鎖DNA（ssDNAまたはssODN）は、高い編集効率かつオフターゲットを減少した、遺伝子ノックイン作製のための最良なCRISPR相同組換え修復（HDR）テンプレートとして、皆様にお使いいただいています。GenScriptは、お客様のCRISPR実験の編集効率を最大化するために、高品質で配列検証済のssDNAを提供しています。
なぜCRISPR遺伝子ノックインHDRテンプレートとしてssDNAを使用するのか？
- 高い編集効率
- 低い細胞毒性
- オフターゲットが起こりにくい
- 編集の正確性の向上
- プライマリー細胞や幹細胞の編集に最適
- トランスジェニック動物モデルの開発に最適
特長
- 150-5,000 ntの長さで、ssDNAの完成品はサンガーシークエンシングにより配列検証済
- 有害な化学物質を使わず、酵素的アプローチで、二本鎖DNA（dsDNA）が検出できないレベルで、DNAへの損傷を最小化
- 最大100 µgの納品量で、フレキシブルな研究デザインを可能にする
- 一度作成したテンプレートは弊社で保管し、再注文時の納期短縮や費用低減を実現
- ssDNAテンプレートとしての合成が困難な遺伝子における専門知識と、16年以上の経験
- cGMP レベルと GMP-like ssDNA 生産が対応可能
CRISPRを用いた相同組み換え修復でのゲノム編集
CRISPR/Cas9は、ターゲットDNA部位へ正確に二本鎖切断（DSBs）を行うため、広く普及しています。ガイドRNA（gRNA）はCas9タンパク質と複合体を形成した後、ターゲットDNA上のprotospacer adjacent motif（PAM）配列を認識します。
Cas9は、エンドヌクレアーゼ活性によりDSBsを引き起こし、その後2種類の修復機構を誘導します。一つは非相同末端結合（NHEJ: non-homologous end-joining）で、DSB部位に変異を導入します。もう一方のメカニズムは相同組換え修復（HDR: homology directed repair）で、切断部位にドナーDNAを挿入し、遺伝子ノックインを可能にします。従来、HDR用のドナーDNAテンプレートとして、二本鎖DNA（dsDNA）使用されてきましたが、最近の研究では、一本鎖DNA（ssDNAまたはssODN）がCRISPRベースの遺伝子挿入、置換及び修正で最適なHDRテンプレートであることが示されました1-5。
サービス内容
| 試験内容 |
試験方法 |
合格基準 |
リサーチグレード (≤2mg) |
プレクリニカルグレード (≥50μg) |
| 純度 |
アガロースゲル電気泳動 |
単一バンド |
✔ |
✔ |
| シークエンスの正確性 |
サンガーシークエンス |
100%正確であること |
✔ |
✔ |
| 吸光度 |
分光光度計 260 nm/230 nm |
≥ 2.0 |
✔ |
✔ |
| 分光光度計 260 nm/280 nm |
1.8~2.0 |
✔ |
✔ |
| バイオバーデン |
TSAプレートでのインキュベーション |
コロニーが形成されないこと |
— |
✔ |
| エンドトキシン |
TALアッセイ |
< 10 EU/mg |
— |
✔ |
| 残存タンパク質 |
Micro BCA Protein Assay Kit |
≤50ug/mg |
— |
✔ |
| 定量的純度 |
Agilent 2100 バイオアナライザー |
≥90% |
— |
追加可能 |
| pH |
pHメーター、プローブ |
バッファーのpHによる |
— |
追加可能 |
| 導電率 |
pH メーター、プローブ |
バッファーの導電率による |
— |
追加可能 |
