概要

RayBiotech社製 RayBio^® Label-Based Antibody Arrayにより、ヒト由来細胞培養上清や血清中の2,000種類、1,000種類、507種類、またば500種類、493種類のサイトカイン関連タンパク質、182種類のヒト肥満関連・アディポカイン関連タンパク質、そしてマウス由来細胞培養上清や血清中の500種類、または308種類のサイトカイン関連タンパク質、さらに1,500種類のラットタンパク質、500種類のラビットタンパク質について、サンプル間における相対的な発現変動を解析します。

概略（fig.1）

RayBio^® Label-Based Antibody Arrayは、サンプル中の抗原を直接ビオチン標識し、アレイ上の捕捉抗体とインキュベートします。検出シグナルは、HRP標識ストレプトアビジンまたは蛍光標識ストレプトアビジンを用いることで得られます。二次抗体を使用しないことで、一度の解析でより多くの抗原の検出を可能としています。

ビオチンラベルアレイの検出例（fig.2）（fig.3）

スキャンデータ例

• データ例
  ・Human L-Series 507（fig.2）
  　The figure shows the RayBio^® label-based Human Antibody Array I Probed with two cell culture supernates.
  　The image were captured using a Axon GenePix laser scanner.
  
  ・Mouse L-Series 308（fig.3）
  　The figure shows the RayBio^® label-based Mouse Array1 Probed with Mouse Sample.
  　The image were captured using a Axon GenePix laser scanner.

fig.4 データ例：Human L-Series 507

fig.5 データ例：Mouse L-Series 308
• プロトコール・マニュアル
  Human Antibody Array 2000（Human L-507＋Human L-493＋Array 3＋Array 4）
  Human Antibody Array 1000(Human L-507＋Human L-493)
  Human Cytokine L-507
  Human Antibody Array 493 (L-493)
  Human Antibody Array 3
  Human Antibody Array 4
  Human Obesity Antibody Array（L-182）
  Mouse Antibody Array 308（L-308）
  Mouse Antibody Array 2
  Mouse Antibody Array L-1308
  Rat Antibody Array 90（L-90）
• 実験の流れ
  1. お預かりしたサンプルの透析
  2. 透析したタンパク質の定量
     透析したタンパク質量を、BCA（Bicinchoninic Acid)法により確認します。
  3. タンパク質のビオチン標識
  4. 標識タンパク質のアレイへの添加、抗原抗体反応、及び洗浄作業
     タンパク質をアレイにアプライし、その後洗浄します。
  5. 蛍光標識ストレプトアビジン添加、結合反応、及び洗浄作業
     蛍光標識したストレプトアビジンをアレイにアプライし、その後洗浄します。
  6. スキャンニング
     GenePix^®4400Aにて、蛍光発光画像を読み取ります。
  7. 画像データ解析
     GenePix^® で読み取った画像データから、Array-Pro Analyzer^® にて、数値データ（Excel）に落とし込みます。数値化データをもとに、バックグラウンド減算、ノーマライゼーション、データ比較などを行い、データをCDに焼き付けます。
  8. データCD発送
     ［解析データのご報告］
     データ解析結果をCD-ROMに収めて、密封状態で、お客様へ直送あるいは、代理店様へご発送致します。

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必要サンプル量

サンプル	ご送付量	適応生物種	サンプル調整方法
細胞培養上清	Human L-2000：＞800～1,200μL Human L-1000：＞400～600μL Mouse L-1308：＞600～900μL その他：＞200～300μL	Human L-1000 Human L-507 Human L-182 Mouse L-308 Rat L-90	100mm Dishで、1×10e6個の細胞を完全培地で24～48時間培養後、0.2％FCS低血清培地で48時間再度培養を行う（細胞培養濃度や培養時間は、細胞株や研究目的により、変わります）。 細胞培養液を回収後、1,000gの遠心により、固形物を除去し、分注してすぐに-80℃以下に保存してください。凍結融解の繰り返しは避けてください。
血清	Human L-2000：＞400～800μL Human L-1000：＞200～400μL Mouse L-1308：＞200～300μL その他：＞100～200μL	Human L-1000 Human L-507 Human L-182 Mouse L-308 Rat L-90	血清分離用チューブで回収するか、血液を30分おいて凝固させ、1,000×gで15分遠心後、分注してすぐに-20℃以下に保存。凍結融解の繰り返しは避けてください。
血漿	Human L-2000＞400～800μL Human L-1000：＞200～400μL その他：＞100～200μL	Human L-1000 Human L-507 Human L-182 Mouse L-308 Rat L-90	EDTA、ヘパリン、クエン酸Naなどの抗血液凝固剤で処理した血液を遠心後、上清を分取して-20℃以下で保存してください。